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游离DNA提取试剂盒的操作手段

更新时间:2023-07-25      点击次数:516
  近几年来,随着基因诊断技术的发展,游离DNA的应用价值越来越大,如优生筛查、肿瘤早期诊断、遗传病检测和病原体感染基因检测等。游离DNA是存在于血液(血浆或血清)、脑脊液等体液中的细胞外DNA,也叫循环DNA。其主要是由单链或双链DNA以及单链与双链DNA的混合物组成,以DNA和蛋白质复合物或游离DNA两种形式存在。分析血液中肿瘤特异性的胞外DNA片段可对普通血液样品进行特异性地肿瘤类型检测。游离DNA提取试剂盒的操作手段你知道吗?
 
  1. 请自行准备:无水乙醇、1.5mL离心管。
 
  2. 取出洗涤液,按以下操作:
 
  a) 洗涤液A:21mL加入9mL无水乙醇;42mL加入18mL无水乙醇。 b) 洗涤液B:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。 c) 配制好的洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。
 
  3. 取1.5mL离心管,加入200μL样本,4μLDNA Carrier混合均匀,加入300μL 裂解液及20μL 消化液,振荡混匀,56℃水浴10 分钟。
 
  4. 加入1000μL无水乙醇,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验。
 
  5. 将吸附柱放入收集管内,将760μL上述溶液转入吸附柱内,静置2 分钟,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液;
 
  6. 将吸附柱放回收集管内,将剩余760μL溶液转移至吸附柱内,重复步骤5。
 
  7. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液A至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。
 
  8. 将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液B至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 分钟,弃收集管内废液。
 
  9. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 分钟,离去残留的洗涤液。
 
  10. 取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入30-50 μL 洗脱液,静置3 分钟,12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟,收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
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